BIOMOLÉCULAS 

INTRODUCCIÓN

Entre los compuestos fundamentales de la materia viva de las células encontramos los carbohidratos, lípidos y proteínas; por esta razón los alimentos que consumen todos los heterotrofos, incluidos el ser humano, deben contener necesariamente estas macromoléculas. 

Mediante el uso de pruebas químicas sencillas se pueden identificar en los alimentos la presencia de estas macromoléculas. 

OBJETIVO

El alumno distinguirá en forma practica que alimentos contienen carbohidratos y cuales proteínas y grasas.

MATERIALES

• 10 tubos de ensaye. 
• 1 gradilla.
• 2 vasos de precipitado de 100 ml.
• 1 agitador.
• 1 mechero Bunsen.
• 2 pinzas para tubo de ensaye.
• 1 gotero.
• 1 pliego de papel estraza.

SUSTANCIAS

Para carbohidratos. 

• Reactivo de Fehling.
• Ácido clorhídrico al 50%
• Lugol (solución alcohólica de yodo).

Para proteínas.

• Reactivo de Biuret.
• Ácido nítrico concentrado.
• Hidróxido de amonio concentrado.

Para lípidos.

• Sudan III.

MUESTRAS DE ALIMENTOS.

• Harinas (Trigo).
• Frutas (Manzana).
• Verduras (Zanahoria).
• Carnes (Hígado de pollo).
• Lácteos (Queso).
• Semillas (Haba).

De preferencia que los alimentos estén hervidos a excepción de las frutas.

PROCEDIMIENTO

Reacciones para identificar carbohidratos.

1.- Prueba de Lugol. (Se utiliza para identificar almidones).

• Coloca una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.
• Agrega dos gotas de Lugol.
• Observa el color que toma la muestra al reaccionar con el Lugol.
• Repite la prueba en por lo menos 5 alimentos.

Si la muestra contiene almidón, con el Lugol adquirirá una coloración azul obscuro (prueba positiva) si no, tomara el color ámbar del reactivo (prueba negativa).

Los residuos contienen almidones y yoduros, que de acuerdo con las normas ecológicas ECOL se pueden verter directamente al desagüe.

2.- Prueba de Fehling ( Se utiliza para identificar azúcares reductores).

•   Agrega 0.5 ml de solución de Fehling A y 0.5 ml de Fehling B a una pequeña porción de muestra colocada en un tubo de ensaye.
• Agrega 2 ml de agua si la muestra es sólida.
• Calienta a ebullición por 2 min, cuidando que la muestra no se proyecte. El calentamiento puede realizarse en baño maría, y la boca de los tubos debe estar dirigida donde no haya personas.
• Observa el color de la reacción y anota los resultados.
• Repite la prueba por lo menos en 5 alimentos diferentes.

Si la muestra contiene azúcares reductores, al reaccionar con el reactivo de Fehling se formará precipitado café rojizo (prueba positiva) si no la muestra quedará de color azul del reactivo (prueba negativa).

Los residuos contienen cobre por lo que la parte líquida debe colocarse en un contenedor plástico para su tratamiento o almacenamiento temporal, hasta que pueda desecharse correctamente.

Reacciones para identificar proteínas.  

1.- Prueba de Biuret. (se utiliza para identificar proteínas y polipéptidos, no menores de 3 aminoácidos, en solución o al estado sólido).

•   Agrega 1 ml de reactivo de Biuret a una pequeña porción de muestra colocada en cada tubo de ensaye.
• Observar la coloración que toma la muestra.
• Anota los resultados.
• Repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

  Si en la muestra hay proteínas se observa que la muestra toma una coloración violeta o morada (prueba positiva), si se queda en  color azul quiere decir que en la muestra no hay proteínas (prueba negativa).

Los residuos contienen cobre por lo que la parte líquida debe colocarse en un contenedor plástico para su tratamiento o almacenado temporal, hasta que                                                    pueda desecharse correctamente.

2.- Reacción xantoproteica (se utiliza para identificar proteínas que contienen aminoácidos aromáticos).

• Agregar 1 ml de ácido nítrico concentrado a una pequeña porción de muestra colocada en un tubo de ensaye, calienta con precaución, sujetando el tubo con unas pinzas para tubo de ensaye, y metiendo y sacando el tubo de la flama para evitar que se proyecte la solución, y dirigiendo la boca tubo hacia en donde no haya personas, puedes calentarlos en baño maría. espera que enfrié.
• Deja resbalar por las paredes del tubo 1 ml de hidróxido de amonio (no respires los vapores) sin agitar, de tal forma que se formen 2 capas.
• Anota los resultados.
• Repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

Si en la muestra hay proteínas, se forma un anillo de color naranja entre las capas formadas por el ácido y el hidróxido (prueba positiva).

Los residuos contienen un ácido y una base, por lo que debes mezclar con cuidado las dos capas para que ambas soluciones (ácido y base) se neutralicen y puedas desecharlas.

Reacciones para identificar lípidos.

1.- Reacción con Sudan III (se basa en que este colorante es soluble en grasas e insoluble en agua).

• Colocar en los tubos pequeñas porciones de muestras.
• Agregar en cada tubo 5 ml de agua de grifo.
• Agregar 3 gotas de reactivo Sudan III.
• Agita energéticamente y deja reposar por 5 minutos.
• Observa la formación de gotas de grasa coloreadas con Sudan III de color naranja, lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).
• Anotar los resultados en el cuadro. 
• Repita la prueba por lo menos en 5 alimentos diferentes.

2.- Prueba con papel estraza.

• Coloca pequeñas porciones de cada alimento en pedazos de papel de estraza.
• Dobla el papel sobre los alimentos y presiona con los dedos.
• Observa si hay áreas del papel que se observan traslucidas y aparentemente húmedas, lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).
• Anotar los resultados.
• repetir la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

 RESULTADOS

1) Para anotar los resultados obtenidos en cada una de las pruebas, se escribe +++ cuando el resultado de la prueba sea positivo( el color sea bien definido, lo cual indica alta concentración de la biomolécula). ++ cuando el resultado de la practica sea regularmente positivo. + para poco positivo y - para negativo ( cuando no del color esperado, lo indicará ausencia de la biomolécula).

 

ALIMENTOS	CARBOHIDRATOS		PROTEÍNAS		LÍPIDOS
	LUGOL	FEHLING	BIURET	XANTOPROTEICA	SUDAN III	ESTRAZA
Zanahoria	++		+	++	++	++
Trigo	++		-	++	-	-
Manzana	+++		++	++	+	++
Hígado	-		-	++	++	++
Queso	++		++	++	++	++
Haba	-		-	++	-	+

BIO - PREG

PRUEBA PARA LA DETECCIÓN DE LA HORMONA HCG EN TIRA

USO DE LA PRUEBA

Prueba en tira rápida y sensible por inmunoensayo para la determinación cualitativa de la hormona gonadotropina corionica humana (hCG) en orina o suero. 

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

La hormona gonadotropina corionica (hCG) es una hormona glicoprotéica sintetizada por la placenta y detectable en sangre y orina de manera temprana después de la implantación de un óvulo fertilizado en el tejido corionico. Es la señal principal y el marcador especifico de que existe embarazo. El uso de Ac monoclonales en la sub-unidad Beta de hCG es un importante avance que proporciona la posibilidad de fabricar una nueva generación de inmunoensayos con especificidad consistente y alta sensitividad para detectar hCG.

MATERIALES

• Muestra de orina o suero.
• Tira HCG

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 

1.- Sumerja la tira en la muestra de orina o suero, asegurese que el nivel de la muestra este por debajo de la línea denominada (max).

2.- Coloque la tira en una superficie plana tan pronto la muestra absorbida empiece a correr en la membrana (4-8 segundos).

3.- Espere para llevar a cabo la interpretación de resultados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Positivo.

Adicionalmente a la línea rosada-rojiza de la zona de control, y otra línea aparecerá en la zona del test. (2.5-3 min).

Negativo.

solo aparece una línea rosada-rojiza en la zona de control y nada en el test.

Invalido.

Si después de 90 seg no aparece líneas en la zona del test ni en la zona de control.

RESULTADOS. 

Positivo

 

 

HIV-1/2

NOMBRE Y FINALIDAD DE USO:

Determine "HIV 1/22" es un inmunoanalisis cualitativo in vitro de lectura visual para la detección  de anticuerpos de los virus  VIH-1 y VIH 2 en suero plasma o sangre hematica . Esta practica esta indicada como ayuda de la detección de anticuerpos al VIH 1/ VIH" en muestras de individuos infectados

OBJETIVO:

Que el alumno pueda conocer la reacción en placa ante anticuerpos de VIH 1 y VIH 2 en suero del paciente infectado ademas de conocer las precauciones necesarias al manejar esas muestras qeu son consideradas de alto riesgo.

INTRODUCCIÓN:

El VIH es un virus que afecta a una cierta cantidad de la población mundial, comparte con los retrovirus las características esenciales de esa familia. Elvirión contiene información genética bajo la forma de ácido ribonucléico (ARN), protegido por una envoltura de membrana. 

Ademas se conoce que esta enfermedad baja las defensas inmunologicas del afectado y que esto lo puede llevar a la muerte a una edad temprana o también ya en una edad adulta.

MATERIAL:

-Equipo de prueba para la prueba

-Pipeta 

-Muestra sanguínea

ADVERTENCIAS:

-Utilice guantes

-No pipete con la boca

-No coma , no bebe, cosméticos y no utilice lentes de contacto en el area donde se realiza la prueba.

-Limpie y desinfecte las salpicaduras de la muestra en el área de trabajo.

-deseche correctamente todo el material utilizado para esta prueba.

PROCEDIMIENTO:

1.- Retire el plástico de  protección de los ensayos.

2.- Para muestras de suero o plasma. 

a. Dispense 50 ul de muestra (con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señalada con una flecha).

b. Esperar entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado .

3.- Para muestras de sangre (venopuncion):

a.Dispense 50 ul de muestra ( con una pipeta de presición ) en la superficie absorbente (señala con una flecha)

b. Espere un minuto y dispense  una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere un minuto de 15  minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

4.- para muestras de sangre (punción digital)

a. Dispense 50 ul de muestra con tubo capilar con EDTA) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b. Espera hasta la sangre impregne totalmente la superficie absorbente ya a continuación dispense una gota de tapón de arrastre en la superficie absorbente.

c. Espere entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado..

RESULTADOS

  POSITIVA

CONCLUSIÓN: 

Con esta sencilla prueba se determina si el  paciente tiene oh no VIH .

PRACTICAS:

"PRUEBA DE RUMPEL. LEEDE" Y "RETRACCION DE COAGULO"

OBJETIVO:

Que el alumno logre realizar la prueba del torniquete satisfactoriamente con el fin de poder identificar petequias en una zona identificada del brazo del paciente manteniendo una precion en el mismo durante 5 minutos.

INTRODUCCION:

Las petequias son pequeñas manchas de una coloracion rojiza formadas por extravasación de un número pequeño formadas por extravasación de un número pequeño de eritrocitos cuando se daña un capilar. Estas mismas son pequeños derrames vasculares cutáneos del tamaño de una cabeza de alfiler.

MATERIAL

-Torniquete o manguito inflable del tenciometro.

- Marcador

-Cronometro

PROCEDIMIENTO

Consiste en mantener elevada la presion en un miembro por un periodo de 5 minutos, con un lazo o el manguito inflable del tensiometro como para medir la T.A y comprimirlo con una presión menor que la sistolica pero mayor que la diastolica para producir estasis sanguinea en las venulas capilares.

material a estudiar: observcion de la piel luego de interrumpir la circulatorio venosa. Se realiza el recuento de las petequias (pequeñas manchas hemorragicas en un circulo de 5 cm de diámetro) normalmente no se debe producir mas de 5 petequias por debajo de la coprencion , especialmente en la cara palmar del antebrazo próxima al manguito neumático. Mas de diez petequias , y sobre todo extendidas mas allá del cuarto superior del antebrazo  es patológico.

Preparación previa:

no es necesaria. No repeteir en el mismo miembro antes de los 7 días.

RESULTADOS:

Valores normales: ninguna petequia o hasta diez petequias en un área de 5 cm, Escala para informar en numero de petequias:

0 A 10= 1 +

10 A 20= 2 +

20 A 50= 3 +

50 o mas petequias = 4 +

valores aumentados: pueden indicar coagulación intravascular difusa, disminución del fibrinogeno, disminución de la protrombina, deficiencia del factor Vll, trombiocitopenia, tromboastenia  enfermedad de von Willebrand, deficiencia de vitamina K . Y puede estar asociado a afecciones no relacionadas con los trastornarnos de la coagulación como: escarlatina , hipertension , diabetes, gripe, sarampion, escorbuto.

Tambien es anormal la prueba en las trombopatias quiza debido a que por falla plaquetaria no hay vasoconstriccion adecuada ni formacion de trombo blanco.

Confiabilidad de los resultados: Buena

Medicamentos que pueden alterar los resultados: Corticoesteroides.

RESULTADOS:

  4 PETEQUIAS EN UN CIRCULO CON UN  RADIO DE 5 CM (+)

CONCLUSIÓN:

EL FIN DE REALIZAR ESTA PRACTICA DIAGNOSTICAR LA FRAGILIDAD DE LAS PAREDES CAPILARES DE EL PACIENTE.

PRACTICA:

"RETRACCIÓN DEL COAGULO"

OBJETIVO:Al termino de la practica el alumno sera capaz de realizar a interpretar la prueba de R.C

INTRODUCCIÓN: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el limite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coagulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al numero de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras, etc.

mide la cantidad de fibrina formada y su retraccion; asi como al numero de funcion de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomisina, que produce la retracción del coagulo.

MATERIAL:

-Tubos de ensaye para centrifuga 

-Alambre de 1mm. de grosor

-Baño Maria de 37ºC

-Equipo de venopuncion.

TÉCNICA

1.- Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml. de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.

2.- Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37 ºC en donde se deja 1hr. Después de la formación del coagulo sin tocarlo.

3.- Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coagulo unido al alambre durante 1 a 2 min.

4.- Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

Ejemplo: Si después de la coagulación 5 ml. De sangre suministraron 3 ml. de liquido.

La retracción es de :; 3X100= 60 por ciento.

                                                                                      5

VALORES NORMALES:

ENTRE 48 Y 64 POR CIENTO.

RESULTADOS:

1ER MUESTRA:    2ML      2X100= 40%  (POR DEBAJO DE LOS VALORES DE REFERENCIA)

                                                     5

2ª MUESTRA: 2.5 ML          2.5X100=50%  (DENTRO DE LOS VALORES NORMALES DE REFERENCIA)

                                                       5

CONCLUSIÓN:

CON ESTA PRACTICA SE ESTUDIO EL LIMITE INFERIOR DE LA RETRACCIÓN DE LA FIBRINA.

VDRL - USR

Introducción:

La Sífilis es una enfermedad generalizada, producida por Treponema pallidum.

Infecta el área genital, los labios, la boca o el ano y afecta tanto a los hombres como a las mujeres. Por lo general se adquiere por contacto sexual con una persona que la tiene. También puede pasar de la madre al bebé durante el embarazo. 

El diagnóstico se basa en la serología, con los métodos se determinan las 2 clases de anticuerpos:

• Cardiolipina: No treponema e inespecíficos.
• Antitreponemas: Específicos.

Debido a la facilidad  en su determinación en el tipo Cardiolopina se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales, exámenes individuales o encuestas de población. La variante técnica más comúnmente empleada llamada VDRL (Venereal Disease Research laboratory) que determina la floculación en placa (cuantitativa) del antígeno con cardiolipina y lecitina.

Material:

• Antígeno en suspensión estabilizado (VDRL).
• Pipetas desechables.
• Placa cóncava.
• Agitador mecánico.
• Cronómetro.
• Microscopio.

Método cualitativo:

1.     En un anillo de la placa cóncava deposite 0.05 ml. del suero problema.

2.     En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra una gota de control 

negativo, extender sobre la superficie del anillo.

3.    Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizada previamente resuspendido.

4.    Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min. Las pruebas que se realicen en clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras, por lo tanto, la placa en rotación se puede cubrir con la tapa de una caja de petri humedecida previamente con una gasa. (Este paso se realizó de manera manual)

5.    Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10x.

Resultados:

Los dos sueros salieron negativos, no hubo floculación.

Conclusiones:

 La identificación del Treponema pallidum es posible después de la realización de la práctica anterior, mediante la observación de la floculación en las placas correspondientes. 

Es una practica muy sencilla pero no es tan segura ya que el echo de que salga negativo no significa que no exista la enfermedad pero para asegurarse se hacen mas pruebas.